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TRADD基因过表达慢病毒在抑制皮肤疤痕形成中的应用  
 【申请号】  CN201310391083.7  【申请日】  2013-09-02
 【公开号】  CN103446188A  【公开日】  2013-12-18
 【申请人】  中国人民解放军第三军医大学第一附属医院  【地址】  400038 重庆市沙坪坝区高滩岩三村29号
 【共同申请人】  
 【发明人】  彭贵勇;袁月;康秀峰;刘云杰;代剑华
 【国际申请】    【国际公布】  
 【进入国家日期】  
 【专利代理机构】    【代理人】  
 【分案原申请号】  
 【国省代码】  85
 【摘要】  本发明公开了TRADD基因过表达慢病毒在抑制皮肤疤痕形成或治疗皮肤疤痕中的应用,并具体公开了TRADD基因过表达慢病毒的制备方法。本发明的TRADD基因过表达慢病毒能同时改善皮肤疤痕的平整度和色泽均匀度。
 【主权项】  TRADD基因过表达慢病毒在抑制皮肤疤痕形成或治疗皮肤疤痕中的应用,其特征在于所述的TRADD基因过表达慢病毒通过如下方法制备而成:?(1)TRADD基因为模板,采用PCR法扩增目的片段,扩增引物序列为:?TRADD?F:5’?CTCAAGCTTCGAATTCGCCACCATGGCAGCTGGGCAA?AATG?3’;?TRADD?R:5’?CCATGGTGGCGAATTCGGCCAGGCCGCCATTGG?3’:?PCR产物回收纯化后与EcoR?I酶切线性化的表达载体pLVX?EGFP?3FLAG?Puro进行重组连接,37℃孵育15min,再50℃孵育15min,立即转化DH5a感受态细胞,最后将已转化的感受态细胞转移至含氨苄青霉素的LB琼脂平板上,37℃培养16h;?(2)接种阳性克隆,保种并分装100μl进行测序,测序验证无误后,接种抽提质粒:?(3)选择生长状态良好的293FT细胞进行包装:取慢病毒表达载体pLVX?TRADD?EGFP?3FLAG?Puro3μl、virapower?packing?mix9μl轻柔混合于1.5ml无血清Opti?MEM?I中,形成溶液A;将36μlLipofectamine2000与1.5ml无血清Opti?MEM?I混合形成溶液B,并室温孵育5min;再将溶液A和B混合,室温孵育20min,形成DNA?Lipofectamine2000复合物,直接转染293FT细胞,转染48h后,收集病毒液。?
 【页数】  15
 【主分类号】  A61K35/76
 【专利分类号】  A61K35/76;C12N15/74;A61P17/02;C12N7/01
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