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一种E2F3基因沉默对前列腺癌动物模型中全血E2F3影响的方法  
 【申请号】  CN201410334972.4  【申请日】  2014-07-14
 【公开号】  CN104131088A  【公开日】  2014-11-05
 【申请人】  天津市泌尿外科研究所  【地址】  300211 天津市河西区平江道23号
 【共同申请人】  
 【发明人】  胡海龙;孙岩;陈涛;谢林国
 【国际申请】    【国际公布】  
 【进入国家日期】  
 【专利代理机构】  北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350  【代理人】  汤东凤
 【分案原申请号】  
 【国省代码】  12
 【摘要】  本发明公开了一种E2F3基因沉默对前列腺癌动物模型中全血E2F3影响的方法,通过免疫组化研究不同前列腺癌组织中E2F3的表达情况,明确E2F3与前列腺癌分级、分期及预后的关系;通过构建针对E2F3的AAV病毒载体,沉默E2F3基因并进行相关的外功能实验;通过建立裸鼠前列腺癌模型,成功应用AAV病毒载体进行体内实验并明确E2F3基因沉默前后裸鼠全血中E2F3mRNA表达情况。本发明的E2F3基因作为前列腺癌基因治疗的高效靶点,为后续的以E2F3为靶点的前列腺癌基因治疗体内实验奠定基础;针对E2F3的重组RNA干扰AAV病毒能够抑制肿瘤细胞的增殖并能够促进细胞的凋亡,并有效抑制动物模型肿瘤的生长并降低了外周血标本内E2F3的表达,为以E2F3为靶点的肿瘤基因沉默疗法提供了可靠的理论和实验基础。
 【主权项】  一种E2F3基因沉默对前列腺癌动物模型中全血E2F3影响的方法,其特征在于,该E2F3基因沉默对前列腺癌动物模型中全血E2F3影响的方法包括:步骤一,通过收集不同前列腺癌石蜡标本,采用real?timePCR、WESTERN、免疫组化,分析E2F3及其所调基因在前列腺癌中的表达情况;步骤二,建立以AVV为载体的RNAi平台,并分析干扰序列对前列腺癌LNCaP细胞中E2F3基因沉默的影响;步骤三,并经体外实验证实E2F3基因沉默对LNCaP细胞中E2F3及相关调控基因的影响及对细胞增殖及凋亡的影响;应用裸鼠进行原位前列腺癌动物模型的构建;步骤四,应用AAV干扰载体进行肿瘤的局部注射后明确肿瘤组织中E2F3在mRNA及蛋白质水平的表达情况及对肿瘤生长抑制情况,最后应用实时定量PCR进行全血E2F3mRNA的检测,明确作为前列腺癌肿瘤标记物的可能性。
 【页数】  20
 【主分类号】  C12Q1/68
 【专利分类号】  C12Q1/68;C12N15/864;G01N33/68;A61K49/00
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