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人血清白蛋白改构基因的化学合成、表达及重组蛋白生产  
 【申请号】  CN99102794.9  【申请日】  1999-03-04
 【公开号】  CN1266100  【公开日】  2000-09-13
 【申请人】  上海贸基生物工程科技有限公司  【地址】  200031上海市长乐路1035号
 【共同申请人】  
 【发明人】  刘志敏
 【国际申请】    【国际公布】  
 【进入国家日期】  
 【专利代理机构】  北京元中专利事务所  【代理人】  汪诚芝
 【分案原申请号】  
 【国省代码】  31
 【摘要】  本发明涉及两种全新的编码人血清白蛋白的脱氧核糖核酸序列,即人血清白蛋白改构基因片段的设计和人工全合成,以及一种用甲醇酵母工程菌大规模生产基因重组人血清白蛋白的生产工艺,发现改构基因能大幅度增加人血清白蛋白的表达量;该生产工艺可使人血清白蛋白结构基因在甲醇诱导启动子的驱动下获得高水平表达,并将人血清白蛋白表达产物分泌到发酵液培养基内,为基因工程人血清白蛋白向更大规模的中试放大提供可靠的实验数据。
 【主权项】  1.本发明涉及到应用重组DNA技术在甲醇酵母细胞如巴斯德毕赤酵母中 生产基因重组人血清白蛋白,其特征在于:甲醇酵母工程菌内含有一种改进的表达 盒的DNA片段,用于生产人血清白蛋白,表达盒的结构依据基因转录方向排列如下: 1)一种巴斯德毕赤酵母菌来源的5’调控区(内含启动子元件),这种5’ 调控区可选择毕赤酵母来源的醇氧化酶(AOX1)基因、二羟基丙酮合成酶(DAS1) 基因或组氨醇脱氢酶(HIS4)基因等,调控区的3’末端与下述2)的序列相连接; 2)一种编码人血清白蛋白的改构新基因,由以下二种形式的DNA片段构成: i)一种改构的人血清白蛋白的全长基因,包含编码人血清白蛋白585个氨 基酸组成的成熟蛋白与24个氨基酸构成的引导肽序列,这种结构的表达 盒其特征在于,利用人血清白蛋白自身的引导肽序列来引导目的基因进行 分泌性表达; ii)用酿酒酵母来源的α一交配因子基因引导肽序列(即AMF prepro序列, 其序列为一种编码85个氨基酸的基因片段,内含有酵母菌KEX-2蛋白酶 加工位点Lys-Arg二个密码子)与编码人血清白蛋白的新基因的成熟基因 片段构成嵌合基因,这种结构的表达盒其特征在于利用酵母内源性引导肽 序列来引导目的基因进行分泌性表达; 这二种人血清白蛋白结构基因的3’末端与下述3)的序列相连接; 3)一种甲醇酵母来源的3’终止序列。这种3’终止序列可采用巴斯德毕 赤酵母来源的AOX1基因AOX2基因、p40基因和His4基因的3’终止序列与汉 逊多形酵母来源的一些基因的3’终止序列。
 【页数】  85
 【主分类号】  C12N15/14
 【专利分类号】  C12N15/14;C12N15/81;C12P21/02
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